Отзывы покупателей о Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
Аккумуляторы Extra Start конструктивно отличаются повышенной устойчивостью к вибрациям и тепловым нагрузкам и являются необслуживаемыми по стандартам DIN. Аккумуляторные батареи Extra Start имеют литые решетки электродов: решетки положительных электродов изготовлены по технологии гравитационного литья, а отрицательных — методов непрерывного литья. Литые решетки обладают исключительными преимуществами, улучшающими электрические характеристики батарей, повышающими их эксплуатационную надежность и продлевающими срок службы. Инструкция на русском языке (руководство пользователя) в комплекте.
3 октября 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
АКБ достался с покупкой машины, по заверениям честного перекупа акб только купленный, новый)) несколько раз глубоко разряжал(( по невнимательности… Пару раз в том году, после полного заряда и поправки концентрации электролита,спустя пол года, выдержал работу магнитолы в течении ночи (забыл отключить)… Но ещё один раз стал для АКБ роковым. В итоге что имеется, закальценированые пластины, одна банка опсыпана и видно свинцовую обрешётку… После запуска двс, при учёте что поработает минут пять на следующий запуск двс хватает, даже при учёте что он произойдет через дней 5… Но не дай бог после того как заглушил двс послушал минут пять музыку, или фарами посветил… Все, можно брать крокодилы и искать того кто прикурит, или толкнет… В принципе батарея умерла по моей вине, и даже с обсыпанный банкой ещё способна завести двухлитровый двс. Зимой с ним проблема была та же, что и летом. Год ещё отходил после последнего глубокого разряда… И может отходил бы дальше, но надоело. Буду менят
Достоинства: Летом и зимой прослужил отлично, даже с учётом того что рассыпалась одна банка… По моей вине, из за неоднократных разрядов…
Недостатки: Осыпалась банка))) Ну не именно банка, а «пакет» активная масса с обрешётки свинцовой…
30 сентября 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
крутит в холод отлично
Достоинства: цена
Недостатки: пока нет
8 сентября 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
АКБ простенький. У меня штатно установлены 2 АКБ. Один из них просто сдох. Купил еще два таких же!
Достоинства: Цена, ручка, параметры, в т.ч. пусковой ток.
Недостатки: Не виден уровень электролита. Электролит все равно выкипает — нужно обслуживание. Не виден заряд.
25 августа 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
Хороший АКБ,рекомендую.
Достоинства: Низкая цена. За год не разу не сел. Неделя на морозе -20 для него вообще не проблема. В — 30 крутит отлично.
Недостатки: Пока нет.
5 августа 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
За такую цену отличный аккумулятор
Достоинства: 3 года — полет нормальный.
Недостатки: нет
16 июля 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
никакое. он и летом не ахти как крутит. за год я его раз 10 заряжал. это не дело. не берите.
Достоинства: цена.
Недостатки: купил для дизеля 1.9 В морозы не держит. если пару дней не заводил машину,то уже и не заведешь. в пустую потраченные деньги. повелся на отзывы ну и цену конечно,но большую роль с играли отзывы положительные.
5 марта 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
Отвратительное впечатления. Всегда был уверен что юлмарт за клиентов.
Достоинства: Неплохо крутил пока был новый
Недостатки: Сдох за одну зиму. Недозаряда не было. В гарантийке отказано. Спасибо. Не берите это гумно.
24 февраля 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
Отлично!
Достоинства: Три зимы справляется со своей задачей на 100%
Недостатки: нет
10 февраля 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
Полный хлам и деньги на ветер. Не рекомендую категорически.
Достоинства: Цена.
Недостатки: Качество ниже плинтуса. После пяти дней зимней стоянки (Санкт-Петербург это не Норильск) машина не запустилась.
3 февраля 2018г. Отзыв о товаре: Аккумулятор Extra Start 6СТ-62N R+
Не отработал и года, постояла машина пару дней и акк заряд брать перестал. Постараюсь сдать по гарантии.
Достоинства: Цена
Недостатки: Срок службы
Отзывы на Аккумулятор Startex 115D31R, 95Ач, CCA 750А, необслуживаемый
Автомобильный аккумулятор Startex SMF115D31R, правый.
Startex SMF115D31R производится на одном из самых передовых и крупных заводов Global Battery, который имеет огромный накопленный опыт и репутацию надежного производителя, согласно всем актуальным требованиям автомобильного рынка.
На каждый аккумулятор Startex гарантия 36 месяцев. Страна-производитель — Корея.
Жидкостные свинцово-кислотные аккумуляторы Startex JIS с высоким пусковым током адаптированы для использования в жестких зимних условиях. Полностью соответствуют стандартам JIS для японских автомобилей. Аккумулятор Startex позиционируется как «Первый зимний аккумулятор».
Компания Global Battery придерживается девиза: «Больше мощных и качественных аккумуляторов по максимально доступным ценам». Институт аккумуляторных технологий при заводе Global Battery постоянно проводит тестирования производимой продукции и научные разработки для улучшения технических характеристик всех аккумуляторов.
Преимущества:
- Двойная крышка — предупреждает возможное загрязнение и добавляет прочности корпусу
- Гидрометр – для быстрой проверки уровня электролита
- Кованные свинцово – кальциевые решетки обеспечивают устойчивость к коррозии и снижают уровень саморазряда
- Повышенный уровень электроемкости
Характеристики:
- Габариты — 305*173*225 мм
- Расположение клемм: правое
- Емкость: 95Ач
- Пусковой ток — 750A
Производитель оставляет за собой право без уведомления менять характеристики, внешний вид, комплектацию товара и место его производства.
В случае, если в описании товара прямо не указано обратное, гарантийный срок на такой товар не установлен.
Отзывы на Аккумулятор Startex 95D26R, 85Ач, CCA 680А, необслуживаемый
Автомобильный аккумулятор Startex SMF95D26R, правый.
Startex SMF95D26R производится на одном из самых передовых и крупных заводов Global Battery, который имеет огромный накопленный опыт и репутацию надежного производителя, согласно всем актуальным требованиям автомобильного рынка.
На каждый аккумулятор Startex гарантия 36 месяцев. Страна-производитель — Корея.
Жидкостные свинцово-кислотные аккумуляторы Startex JIS с высоким пусковым током адаптированы для использования в жестких зимних условиях. Полностью соответствуют стандартам JIS для японских автомобилей. Аккумулятор Startex позиционируется как «Первый зимний аккумулятор».
Компания Global Battery придерживается девиза: «Больше мощных и качественных аккумуляторов по максимально доступным ценам». Институт аккумуляторных технологий при заводе Global Battery постоянно проводит тестирования производимой продукции и научные разработки для улучшения технических характеристик всех аккумуляторов.
Преимущества:
- Двойная крышка — предупреждает возможное загрязнение и добавляет прочности корпусу
- Гидрометр – для быстрой проверки уровня электролита
- Кованные свинцово – кальциевые решетки обеспечивают устойчивость к коррозии и снижают уровень саморазряда
- Повышенный уровень электроемкости
Характеристики:
- Габариты — 260*173*225 мм
- Расположение клемм: правое
- Емкость: 85Ач
- Пусковой ток — 680A
Производитель оставляет за собой право без уведомления менять характеристики, внешний вид, комплектацию товара и место его производства.
В случае, если в описании товара прямо не указано обратное, гарантийный срок на такой товар не установлен.
Безопасность | Стеклянная дверь
Мы получаем подозрительную активность от вас или кого-то, кто пользуется вашей интернет-сетью. Подождите, пока мы подтвердим, что вы настоящий человек. Ваш контент появится в ближайшее время. Если вы продолжаете видеть это сообщение, напишите нам чтобы сообщить нам, что у вас возникли проблемы.
Nous aider à garder Glassdoor sécurisée
Nous avons reçu des activités suspectes venant de quelqu’un utilisant votre réseau internet. Подвеска Veuillez Patient que nous vérifions que vous êtes une vraie personne.Вотре содержание apparaîtra bientôt. Si vous continuez à voir ce message, veuillez envoyer un электронная почта à pour nous informer du désagrément.
Unterstützen Sie uns beim Schutz von Glassdoor
We hebben verdachte activiteiten waargenomen op Glassdoor van iemand of iemand die uw internet netwerk deelt. Een momentje geduld totdat, мы узнали, что u daadwerkelijk een persoon bent. Uw bijdrage zal spoedig te zien zijn. Als u deze melding blijft zien, электронная почта: om ons te laten weten dat uw проблема zich nog steeds voordoet.
Hemos estado detectando actividad sospechosa tuya o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real.Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para informarnos de que tienes problemas.
Hemos estado percibiendo actividad sospechosa de ti o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real. Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para hacernos saber que estás teniendo problemas.
Temos Recebido algumas atividades suspeitas de voiceê ou de alguém que esteja usando a mesma rede.Aguarde enquanto confirmamos que Você é Uma Pessoa de Verdade. Сеу контексто апаресера эм бреве. Caso продолжить Recebendo esta mensagem, envie um email para пункт нет informar sobre o проблема.
Abbiamo notato alcune attività sospette da parte tua o di una persona che condivide la tua rete Internet. Attendi mentre verifichiamo Che sei una persona reale. Il tuo contenuto verrà visualizzato a breve. Secontini visualizzare questo messaggio, invia un’e-mail all’indirizzo per informarci del проблема.
Пожалуйста, включите куки и перезагрузите страницу.
Это автоматический процесс. Ваш браузер в ближайшее время перенаправит вас на запрошенный контент.
Подождите до 5 секунд…
Перенаправление…
Заводское обозначение: CF-102 / 6752b9106f5676b5.
Austin Custom Brass Doubler Flugelhorn! Наш самый продаваемый товар!
Набор для флюгельгорна ACB! Получите то, что вам нужно для удвоения на флюгельгорне! В комплекте:
Флюгельгорн удвоителя ACB (отделка на ваш выбор!)
Мундштук для флюгельгорна ACB Fab5 (рядом с ободом 3C)
K&M Flugel Stand
Сумка для двойного мундштука Gard с логотипом ACB
Кожаная сумка для тройных труб Gard Elite (можно настроить на 1 трубу и флюгель удвоителя!)
Флюгельгорн удвоителя ACB (с выбором отделки!)
Austin Custom Brass создал захватывающую линейку высококачественных и недорогих индивидуальных инструментов, предназначенных для дублирования.Если вы хотите играть на флюгельгорне, но не можете оправдать уплаты больших денег за фирменный инструмент, наш флюгельгорн Doubler был создан с учетом ваших потребностей. Название Doubler предназначено для нашей серии рупоров, которые отличаются высоким качеством и стабильностью и предназначены для тех, кто нуждается в профессиональном рупоре, но не играет на нем достаточно регулярно, чтобы оправдать такие инвестиции. Мне потребовались бы многие рожки профессионального качества, представленные на рынке. Эта серия дает людям возможность «удвоить» на другом роге, не нарушая при этом банк и не жертвуя качеством.
Это отличный вариант, если вам нужен флюгельгорн для игры в группе биг-бэндов или вы хотите расширить свою палитру в качестве джазового солиста. Это также отличный вариант для возвращающегося игрока, любителя или студента!
Этот флюгельгорн имеет 6-дюймовый раструб, который почти на 100% состоит из меди, и классическое отверстие для флюгельгорна (0,413 дюйма). В нем используется большой конус хвостовика. Рупор имеет триггер с третьим клапаном для улучшения интонации. Клапаны из монеля и дно -пружина Этот флюгельгорн разработан, чтобы упростить переключение между флюгелем и вашей трубой или корнетом.
Мы выполняем несколько индивидуальных изменений перед отправкой вам, включая точную центровку клапана, настраиваемую регулировку пружины, новую головку, обширные испытания на люфт и многое другое. На настройку и игровое тестирование мы тратим не менее 2 часов! В результате получился невероятный флюгельгорн по очень хорошей цене!
Вот отзыв одного из наших клиентов Марка Руссо (28.03.19):
«Трент и команда ACB сделали это снова….. на 3-м ходу Гомер в низу 9-го! Я был клиентом ACB с самого начала, и это мой второй дублер. Я не могу сказать достаточно хороших слов об этом роге! Он имеет гладкий, ровный тон по всему рогу. Интонация довольно хороша, она достаточно смешивается и сокращает часть, чтобы преодолеть полосу, и очень удобно переходить между этим и моим Bb. Вы не найдете лучшего рожка по такой цене. Bravissimo ACB !! »
Это лучший флюгельгорн, который вы можете найти! Вы не найдете другого недорогого флюгеля с таким количеством оптимизаций.Прокрутите вниз, чтобы узнать о различных вариантах отделки этих флюгелей! Спасибо за вашу огромную поддержку ACB!
Мы работаем с отличной компанией, которая производит флюгельгорны нового поколения ACB во многих вариантах. Если вы сделаете предварительный заказ на инструмент сегодня, вы зафиксируете эту цену, независимо от того, какой вариант вы выберете (в будущем мы добавим дополнительные опции). Воспользуйтесь этим специальным предложением уже сегодня!
Вот доступные варианты:
Необработанная латунь (со временем на ней образуется приятная патина, некоторые начинают ее развивать при отгрузке с завода в наш магазин)
Прозрачный лак (наш вариант отделки по умолчанию за последние 8 лет)
Сатинированное лакокрасочное покрытие (мы очень довольны внешним видом этого покрытия, и клиентам он понравился)
Пластина серебристая полированная (шикарно!)
Обратите внимание, что за международную доставку взимается дополнительная плата (обычно 40-50 долларов США в зависимости от страны для приоритетного транзита).Свяжитесь с нами по электронной почте перед заказом.
Мундштук из флюгеля ACB Fabrication 5!
После того, как многие клиенты, преподаватели, студенты и поклонники ACB попросили предоставить отличный вводный мундштук для людей с ограниченным бюджетом, мы чрезвычайно гордимся тем, что производим эти флюгельгорнные мундштуки ACB Fabrication 5 Series.
Мундштук для флюгельгорна серии Fabrication — идеальное обновление для флюгельгорнов нашего удвоителя ACB и всех, кто ищет высококачественный флюгельгорн по разумной цене.Мы взяли наш популярный ободок для мундштука 3CS и изменили глубину чашки соответственно для большинства игроков. Размер хвостовика соответствует нашему большому конусу хвостовика.
Также в комплекте: сумка для двойного мундштука Gard с логотипом ACB!
Этот фантастический кожаный чехол для мундштука от Gard украшен логотипом ACB! Помимо невероятной защиты, эти сумки хорошо сделаны, изготовлены с учетом экологических требований, а работникам выплачивается прожиточный минимум.Нет ничего лучше, чем это! Внутренняя часть этих подсумков для мундштуков обита бархатом. На спине есть петля для ремня (а также липучка) для удобства использования. Это идеальный способ транспортировки всех ваших мундштуков ACB!
Gard Elite Кожаная сумка для концертов Triple Trumpet Gig!
У нас на складе ACB есть новые фантастические футляры для труб! Встречайте компактный футляр для тройных труб Gard Elite! Эти сумки не только обеспечивают невероятную защиту, но и сделаны качественно и экологически рационально, а рабочим выплачивается прожиточный минимум.Нет ничего лучше, чем это!
Элегантный и стильный футляр для трубы из мягкой кожи водяного буйвола. Это идеальный чехол для удобных путешествий. Превосходная защита является результатом запатентованной компанией Gard подвесной системы среднего мешка, которая удерживает трубу на месте, а затем усилена вставками из ПВХ толщиной 2 мм. В этом кейсе также есть защита от дождя, которая закрывает кейс, и багажная бирка. Его можно использовать как рюкзак или носить через плечо. В переднем мешочке можно разместить множество аксессуаров!
Вмещает 3 трубы (ИЛИ 2 тр. + Пик. ИЛИ 2 тр. + Пригн.).Может быть сконфигурирован для удержания 1 трубы и 1 флюгеля.
Что говорит Гард:
ЗАЩИТА
- GARD Запатентованная система защиты, поролоновые ремни / подушечки и конические вставки для ваших инструментов.
- Набивка из плотной, толстой и ударопрочной пены высокой плотности. Внутренняя часть сумки покрыта пеной толщиной 20 мм со всех сторон инструмента.
- Защитная молния 1 ”защищает инструмент от случайных царапин металлическими молниями.
ДОЛГОВЕЧНОСТЬ
- Прочные молнии YKK.
- Сверхпрочные металлические изделия из латуни с гальваническим покрытием.
- Все несущие соединения склепываются и прошиваются.
ДИЗАЙН / КОМФОРТ
- Ручка для переноски Ручка из натуральной кожи: мягкая на ощупь и легко ложится в руку.
- Ремешок для рюкзака можно использовать как плечевой ремень.
- Кожаная бирка для багажа в комплекте.
- Каждый кейс снабжен специальным дождевым чехлом, который защищает его от повреждения водой в ненастную погоду.
Приблизительные размеры:
ВНУТРЕННИЕ РАЗМЕРЫ
20,75 x 6,50 x 10 (в дюймах)
НАРУЖНЫЕ РАЗМЕРЫ
23 x 8 x 12,5 (дюймы)
РАЗМЕРЫ КАРМАНА (два)
20 x 10 (в дюймах) и 11 x 10 (в дюймах)
Если у вас есть дополнительные вопросы, отправьте нам письмо по электронной почте!
Перед заказом ознакомьтесь с нашей политикой доставки и возврата.
Также обратите внимание, что вес, указанный в объявлении, — это вес брутто, а не фактический вес товара.
Austin Custom Brass, ACB, Трент Остин, На продажу, магазин нестандартной латуни, нестандартная труба, Канзас-Сити, kc, kcmo, труба, корнет, флюгельгорн, Адамс, труба Адамса, семейство Адамсов, мундштук, мундштуки, индивидуальный мундштук, лучший дешевый флюгельгорн , дешевый флюгель, исн.
задумчивый флюгельгорн,
Assassin’s Creed® Brotherhood в Steam
Об этой игре
Живите и дышите как Эцио, легендарный мастер-ассасин, в его упорной борьбе против могущественного Ордена тамплиеров.Он должен отправиться в величайший город Италии, Рим, центр власти, жадности и коррупции, чтобы нанести удар в самое сердце врагу.Для победы над коррумпированными тиранами потребуется не только сила, но и лидерство, поскольку Эцио командует целым Братством, которое сплотится на его сторону. Только работая вместе, Ассасины могут победить своих смертельных врагов.
И впервые мы представляем отмеченный наградами многопользовательский уровень, который позволяет вам выбирать из широкого спектра уникальных персонажей, каждый со своим фирменным оружием и методами убийства, и сравнивать свои навыки с другими игроками со всего мира.
Пора присоединиться к Братству.
Основные характеристики
- СТАТЬ ЛЕГЕНДОЙ — Возьмите Эцио, теперь легендарного Ассасина, в новое приключение с 15+ часами однопользовательского игрового процесса, основанного на сюжете.
- ВЕДУЙТЕ И УПРАВЛЯЙТЕ ЛЕГЕНДАРНЫМ БРАТСТВОМ — Набирайте и настраивайте свою собственную гильдию. Тренируйте и повышайте уровень убийц и командуйте ими, чтобы они помогли вам в ваших поисках.
- РАЗВЕРТЫВАЙТЕ СЕКРЕТНОЕ ОРУЖИЕ — Быстро уничтожайте своих врагов, используя такие инструменты, как ядовитые дротики, парашюты, двойные скрытые лезвия, скрытое оружие и продвинутый летательный аппарат в вашем распоряжении.
- ВЫИГРЫВАЙТЕ СЕРДЦЕ ГОРОДА — Используйте с трудом заработанную валюту, чтобы оживить разрушающийся столичный город. Сплотите граждан на свою сторону и разблокируйте дополнительные фракции и миссии.
- МНОГОПОЛЬЗОВАТЕЛЬСКАЯ ИГРА, ОТМЕЧЕННАЯ НАГРАДАМИ — Выбирайте из нескольких аутентичных классов персонажей, каждый из которых имеет собственное фирменное оружие и убийственные приемы. Благодаря детализированным картам и широкому спектру уникальных многопользовательских режимов вы никогда не будете сражаться одинаково дважды.
- БОНУСНЫЙ СОДЕРЖАНИЕ:
- Project Animus Обновление №1 Многопользовательский DLC:
Чтобы выжить на коварных узких дорогах и многоуровневой архитектуре карты Мон-Сен-Мишель и в сложном многопользовательском режиме Advanced Alliance, Abstero новобранцы должны будут использовать в своих интересах свободные и отточенные охотничьи навыки.
- Project Animus Обновление № 2 Многопользовательский DLC:
Карта Pienza представляет собой идеальную бесплатную игровую площадку, где хищники и цели могут смешиваться и исчезать. В многопользовательском режиме «Захват сундуков» две команды по три игрока в каждой работают вместе с другими тамплиерами для защиты или захвата сундуков. Также включена новая функция Templar Score, чтобы вознаградить усердную работу новобранцев Абстерго.
- «Исчезновение да Винчи» DLC для одиночной и многопользовательской игры:
После падения Борджиа Леонардо да Винчи похищен, и Эцио отправится в неустанные поиски, чтобы восстановить его, открывая новые локации и особенности игрового процесса.Дополнение для многопользовательской игры — это самое большое расширение отмеченной наградами многопользовательской игры, включая новую карту, новых персонажей и игровые режимы.
- Project Animus Обновление №1 Многопользовательский DLC:
© Ubisoft Entertainment, 2011 г. Все права защищены. Assassin’s Creed, Ubisoft и логотип Ubisoft являются товарными знаками Ubisoft Entertainment в США и / или других странах.
Обзор пикапаEMG ACB — Discussion Forums
Обратите внимание, что это заархивированная тема , поэтому она заблокирована, и на нее невозможно ответить.Однако вы можете начать новую тему и обратиться к ней со ссылкой: http://www.banjohangout.org/archive/269297
Jeff250 — Опубликовано — 25.08.2013: 08:34:19
Я только что отыграл три концерта за три дня со звукоснимателем EMG ACB и подумал, что другим может быть интересен мой опыт работы с ним.
Предыстория: Я играю в группе «современной кантри», где мне приходится соревноваться с громкими барабанами и несколькими электрическими инструментами. У нас есть собственная система IEM, но иногда используются клинья для пола.Усиление моего банджо было проблемой более 30 лет, и я пробовал множество решений, включая использование сценического микрофона, Schatten BJ-02, звукоснимателя Fishman Rare Earth Active Banjo и микрофона / предусилителя Goldtone ABS. Я никогда не был по-настоящему доволен результатами. Большинство звукоснимателей, которые я использовал, имеют тенденцию давать банджо очень резкую, холодную, «ледяную» атаку, которая мне никогда не нравилась, несмотря на агрессивную эквализацию и использование множества различных предусилителей. Использование микрофона в среде с большой громкостью имеет свои проблемы с обратной связью, утечкой звука из микрофона и т. Д.Недавно я установил EMG ACB на свой Gibson RB250 и потренировался в течение трех дней. Пока что очень доволен результатами.
Общий дизайн очень элегантный и был одним из самых простых в установке, которые я когда-либо делал. Мне очень понравилась возможность регулировать расстояние срабатывания от головки с помощью небольшой отвертки при наборе тона, и что не было необходимости выламывать паяльник, чтобы прикрепить какой-либо из проводов. Единственная реальная проблема с установкой, с которой я столкнулся, заключалась в том, чтобы подключить комбинированный выходной разъем и регулятор громкости.Он прикрепляется к банджо, продвигая небольшую прямоугольную полоску металла за крючки кронштейна. Проблема, с которой я столкнулся, заключалась в том, что металлическая полоса была почти плоской и не приближалась к кривизне банджо. В итоге мне пришлось согнуть полоску, чтобы она подошла по размеру. Кроме того, он был немного толще, чем оставалось место между тональным кольцом и крючками. Мне пришлось сначала удалить крючки кронштейна, расположить полосу, а затем снова установить крючки, приложив больше усилий, чем мне хотелось бы. Я не знаю, является ли это единичным инцидентом, но другие могут столкнуться с подобной проблемой.Я не стал устанавливать дополнительную стальную полосу или акустические заглушки, так как был доволен звуком без них.
Моя концертная установка включала запуск банджо через беспроводную сеть Line 6 G30> Goldtone ABS Pre-amp> DI box> в наш микшер IEM, который разделен на FOH. Вам действительно не нужно использовать дополнительный предусилитель, но мне нравятся функции эквалайзера и реверсирования фазы предусилителя ABS, поскольку звукосниматель сам по себе не был таким четким, как хотелось бы. Эта комбинация дала мне звук, наиболее близкий к микрофонному (эд) банджо, который я когда-либо слышал через акустическую систему.У него не было типичной атаки «ледоруба», и тон был очень теплым. EMG также очень хорошо реагирует на динамику пика.
Если честно, это звукосниматель, и в этом тоне все еще присутствует «электрический» характер. Я слышу это больше через мою систему IEM, чем через FOH или напольные клинья. Но никогда еще не был так доволен своим тоном.
Плюсы: Довольно простая установка (за исключением проблемы с металлической полосой, которая идет за кронштейнами), у него нет атаки «ледоруба», как у большинства звукоснимателей, хорошо реагирует на динамику звукоснимателей, не дает обратной связи на большой громкости. , имеет регулятор громкости и звучит как банджо.
Минусы: все еще имеет небольшое качество звукоснимателя, хотя и намного хуже, чем у любого другого звукоснимателя, который я пробовал. Работает от батареек cr2032 (то, что я обычно не ношу с собой или легко найду в ближайшем удобном магазине). Я все еще чувствовал, что мне нужно эквализовать банджо, чтобы набрать максимумы. Это можно было бы преодолеть с помощью большего количества настроек звукоснимателя, но каждое место встречи отличается, и настройка эквалайзера в любом случае становится необходимой.
Надеюсь, это поможет любому, кто думает о EMG ACB.
Отредактировал — Jeff250 25.08.2013 14:27:25
Банджо Джо — Опубликовано — 25.08.2013: 08:50:44
Я тоже уже давно им пользуюсь. Я полностью согласен со всем, что вы говорите. У меня не было таких проблем с монтажным кронштейном, как у вас, но я точно знал, о чем вы говорите.
Мне кажется, что звук звукоснимателя уменьшается по мере того, как вы поднимаетесь вверх по грифу. Я обнаружил, что это наиболее распространено на нижнем уровне.
Я действительно использовал стальные полосы, которые они включают в качестве опции. Я думаю, что они также уменьшают гитарность звука, но добавляют немного той «хрупкости», о которой вы говорили … ледяное качество других звукоснимателей.
До этого у меня была пассивная версия редкоземельного элемента Fishman (в основном эквивалент сегодняшнего Hatfield-Jones), и у нее было меньше качества гитары, но да, она тоже могла быть довольно ледяной.
В наши дни я предпочитаю смешивать ACB с клипом на микрофоне через мой усилитель Marshall.Я использовал Goldtone ABS, но я использовал конденсатор Shure 98. Это приятное комбо, хотя и немного отзывчивое.
Отредактировал — Джо, парень банджо, 25.08.2013 08:51:46
PeterJ — Опубликовано — 26.08.2013: 06:00:20
Звучит как интересное (хотя и немного дорогое) решение. Рад, что это работает для вас, ребята.
Кстати, я использую и оригинального Джонса в одном банджо, и раннего Фишмана в другом, и я никогда не слышал ледяного, хрупкого звука — в основном это просто дополнительное ударное звучание, так что если что, есть более низкий конец, чем высокий конец для меня.
Банджо Джо — Опубликовано — 26.08.2013: 11:54:16
Ну, всегда сложно описать звуки словами. Мне понравился распад нот на рыбочеловеке. Это был красивый банджо. Но тон мог стать резким / пронзительным / тонким, особенно в области шеи … Я не знаю, как еще это описать. Конечно, я действительно вырезал низкие и высокие частоты на эквалайзере. Это может быть что-то в вашей настройке, вашей установке или эквалайзере, что дает вам разные результаты. Не знаю! А может быть, мы просто используем разные слова для обозначения одного и того же 🙂
PeterJ — Добавлено — 26.08.2013: 12:23:46
Верно — пытаться описать звук словами всегда занимательно.
Производство
цАМФ аденилатциклазой G вызывает дифференцировку преспор в слизняках Dictyostelium
Развитие. Авторская рукопись; доступно в PMC 2008 8 января.
Опубликован в окончательной редакции как:
PMCID: PMC2176081
EMSID: UKMS1326
Отделение клеточной биологии и биологии развития, Колледж наук о жизни, Университет Данди, Данди, Ангус DD1 5EH, UK
Окончательная отредактированная версия этой статьи издателем доступна на сайте разработки. См. Другие статьи в PMC, в которых цитируется опубликованная статья.РЕЗЮМЕ
Энцистация и споруляция являются решающими переходными этапами в развитии одиночных и социальных амеб, соответственно. Хотя об энцистации известно немного, для споруляции требуется как внеклеточный, так и внутриклеточный цАМФ. После агрегации социальных амеб, связывание внеклеточного цАМФ с поверхностными рецепторами и внутриклеточное связывание цАМФ с цАМФ-зависимой протеинкиназой (ПКА) действуют вместе, вызывая дифференцировку преспор. Позже второй эпизод активации PKA вызывает созревание спор.Аденилилциклаза B (ACB) продуцирует цАМФ для созревания, но источник цАМФ для индукции преспор неизвестен. Мы показываем, что белок аденилатциклазы G (ACG) активируется в преспоровой ткани после агрегации. acg нулевые мутанты демонстрируют пониженную дифференцировку преспор, которая становится очень серьезной, когда ACB также удаляется. ACB обычно экспрессируется в клетках prestalk, но активируется в области prespore acg null структур . Эти данные показывают, что ACG индуцирует дифференцировку преспор в клетках дикого типа, при этом ACB способен частично брать на себя эту функцию в его отсутствие.
Ключевые слова: формирование паттерна , спецификация клеточного типа, споруляция, энцистация, аденилатциклаза G, Dictyostelium discoideum
ВВЕДЕНИЕ
Энцистация и споруляция — обычные переходы жизненного цикла, которые позволяют простейшим, грибам и низшим растениям выжить в питательных веществах. истощение и другие формы стресса. Мало что известно о сигнальных путях, которые контролируют инцистацию, что в случае патогенных протистов имеет важное медицинское значение.Например, для Entamoeba histolytica , вызывающего второе по летальному исходу заболевание, передаваемое паразитами, амебиаз, киста является инфекционной стадией заболевания (Stanley, 2003). Инфекции Acanthamoeba castellani , вызывающие кератит и амебный энцефалит, трудно поддаются лечению, поскольку амебы дифференцируются в высокоустойчивые цисты внутри тканей хозяина. (Lloyd et al., 2001; Marciano-Cabral, Cabral, 2003; McClellan et al., 2002). В основном из-за отсутствия генетических инструментов для исследования этого процесса мало что известно о сигнальных путях, которые контролируют инцистацию.
Социальные амебы реагируют на стресс, связанный с питательными веществами, либо энцистированием по отдельности, либо агрегированием с образованием плодовых структур, где большая часть клеток дифференцируется в споры. Небольшая часть клеток альтруистически строит стебель, чтобы поддерживать массу спор и способствовать их распространению. В частности, вид D.discoideum обладает превосходной генетической податливостью, а пути, контролирующие споруляцию, были тщательно изучены. Здесь споруляция включает первую фазу, преспорную дифференцировку, которая происходит вскоре после агрегации.На этой стадии клетки синтезируют компоненты оболочки споры в предспоровых везикулах, но в остальном остаются амебоидными. Преспорная дифференцировка запускается внеклеточным цАМФ, действующим на рецепторы цАМФ (cAR), и внутриклеточным цАМФ, действующим на PKA (Schaap and Van Driel, 1985; Hopper et al., 1993). Вторая фаза, созревание спор, происходит после формирования стебля, и этот процесс запускается исключительно высоким уровнем активности PKA (Mann et al., 1994). Созревание спор включает относительно незначительные изменения в экспрессии генов, но сопровождается значительными физиологическими изменениями: везикулы преспоры сливаются с плазматической мембраной, закладывая первые слои оболочки спор и высвобождая предшественников для синтеза внешних слоев (West and Erdos, 1990 ).
Активация PKA во время созревания спор требует активности аденилатциклазы ACB, кодируемой AcrA , которая максимально экспрессируется на стадии плодового тела (Kim et al., 1998; Meima and Schaap, 1999; Soderbom et al., 1999). Кроме того, этот процесс требует инактивации внутриклеточной фосфодиэстеразы цАМФ, RegA. Этот необычный фермент содержит домен регулятора ответа, который является мишенью фосфорелейной системы, которая регулируется сенсорными гистидинкиназами / фосфатазами (Shaulsky et al., 1996; Шаульский и др., 1998; Томасон и др., 1998; Thomason et al., 1999). Пептид, выделяемый стеблевыми клетками, SDF-2, активирует сенсорную гистидинфосфатазу DhkA, вызывая дефосфорилирование и, следовательно, инактивацию RegA. Это, в свою очередь, вызывает накопление цАМФ и активацию PKA (Anjard and Loomis, 2005; Wang et al., 1999). PKA остается важной на стадии спор, когда она контролирует состояние покоя спор. Высокая осмоляльность окружающей среды в головке спор удерживает споры в состоянии покоя, и этот эффект опосредуется аденилатциклазой ACG, которая имеет внутримолекулярный осмосенсор (Saran and Schaap, 2004; Van Es et al., 1996; Вирди и др., 1999).
Требования ACB и ACG для активации PKA при созревании спор и покое хорошо задокументированы. Однако неясно, какой фермент продуцирует внеклеточный цАМФ, который запускает дифференцировку преспор. Третья аденилилциклаза Dictyostelium , ACA, в основном активна во время агрегации и исчезает из области prespore, как только начинают формироваться слизни (Pitt et al., 1992; Verkerke-van Wijk et al., 2001). Нулевые мутанты в ACB / AcrA показывают нормальную экспрессию гена prespore (Soderbom et al., 1999), а мРНК ACG обнаруживалась только в спорах (Pitt et al., 1992). Однако биохимический анализ активности аденилатциклазы в образцах aca- продемонстрировал наличие активности аденилилциклазы, которая, как и ACG, предпочтительнее Mn 2+ -АТФ по сравнению с Mg 2+ -АТФ в качестве субстрата. Поскольку для ACB верно обратное, это предполагает, что ACG может быть выражен в слизнях (Meima and Schaap, 1999).
В этой работе мы более внимательно проанализировали паттерн транскрипции и трансляции ACG, изучая слияния гена промотор-репортер ACG и специфических антител к ACG.Наши данные показывают, что ACG транскрибируется на низких уровнях в течение всего развития, тогда как белок ACG заметно усиливается после агрегации в преспоровых областях слизняков. Анализ одиночных и двойных нулевых мутантов в ACG и ACB показывает, что ACG важен для дифференцировки преспор, но что его функция частично дублирует ACB. Эта работа дополняет параллельные исследования, в которых мы показываем, что ACG глубоко консервативен в эволюции амебазо и регулирует энцистацию и эксцистанцию по аналогии с его ролью в образовании спор и прорастании.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Культивирование и развитие клеток
Клетки D.discoideum выращивали в стандартной аксенической среде, которая была дополнена антибиотиками, как указано. Для индукции многоклеточного развития клетки собирали из экспоненциально растущих культур, дважды промывали PB (10 мМ Na / K-фосфатный буфер, pH 6,5) и инкубировали при 22 ° C на агаре PB (1,5% агар в PB). Чтобы вызвать способность к индукции преспорового гена, клетки голодали на агаре PB в течение 16 часов при 6 ° C и 2 часов при 22 ° C до образования территорий агрегации.Затем клетки ресуспендировали до 2 × 10 6 клеток / мл в PB и встряхивали при 150 об / мин и 22 ° C в присутствии и в отсутствие цАМФ.
Генные конструкции и трансформация
Слитые конструкции промотора ACG были получены с репортерным геном LacZ (gal) и с модифицированным LacZ, называемым ile-gal. В ile-gal LacZ модифицируется добавлением на N-конце гена убиквитина и заменой стартового кодона LacZ кодоном изолейцина.Фрагмент убиквитина отщепляется во время трансляции, оставляя β-галактозидазу с открытым изолейцином, что снижает стабильность белка до периода полужизни 30 минут (Detterbeck et al., 1994). Для обеих конструкций 2855 п.н. последовательности ДНК ACG, включая 2810 п.н. полной 5′-межгенной области и 45 п.н. кодирующей последовательности, были амплифицированы из вектора pGACG (Pitt et al., 1992) с использованием праймеров ACGpr5 ‘и ACGpr3’ () , на которых расположены сайты XbaI и BglII соответственно. После переваривания XbaI и BglII амплифицированный продукт клонировали в pDdGal-17, расщепленную XbaI / BglII (Harwood and Drury, 1990), для создания ACG :: gal и использовали для замены фрагмента промотора XbaI / BglII psA из вектора psA-ile. -gal (Деттербек и др., 1994) для создания ACG :: ile-gal. Векторы вводили в клетки AX3 и мутанты acrA- электропорацией, и трансформанты отбирали для роста при 100 мкг / мл G418 для ACG :: gal и при 200 мкг / мл для конструкций ACG :: ile-gal.
Таблица 1
Олигонуклеотиды, используемые в данной работе
| ACGpr5 ‘ | 5′-CACTCTAGAGGCGGCGATGTCACCAAAG |
| ACGpr3′ | 5′-TGGAGATCTTTCAACATATGATTTAGATAG |
| AcrApr5 ‘ | 5′-GCTCTAGATGATCTTGAATTTTGTTGATTTTCC |
| AcrBpr3 ‘ | 5′-GGGAGATCTATCTAATTTTGAACAATTATTAC |
| AcgKO1 5′-CGGGATCCCTAAATCATATGTTGAAGGATATCC | |
| AcgKO2 5′-AGGTACCCCCACTTGATATATGACTCATATC | |
| AcgKO3 5′-CGCCTCTAGAATGGAGTCTACGGG | |
| AcgKO4 5′-CGGGATCCGGTGGTGGTGGAGAATTATCAT | |
| AcrAcat5 ‘ | 5′-CCTAGAATTCAACCACTGAGAAAATGTTGG |
| AcrAcat3′ | 5′-TTACGGATCCCGTTCACCATCGAT |
| ACGRT5 ‘ | 5′-CCCGCAATGTATTTATTATCCTC |
| ACGRT 3 ‘ | 5′-CCCCTGTTGAATTAATATCTAATCC |
Слияния генов промотора AcrA с лабильной подвздошной галактикой и стабильной ала-гал (Detterbeck et al., 1994) были получены путем амплификации 5′-межгенной области AcrA 819 п.н. из геномной ДНК AX2 с праймерами AcrApr5 ‘и AcrApr3’, содержащими сайты рестрикции XbaI и BglII (). Амплифицированный продукт вставляли как в вектор ile-gal, так и в ala-gal, как описано выше, для создания AcrA-ile-gal и AcrA-ala-gal. Оба вектора были введены в клетки AX2 и acg-. Трансформанты отбирали для роста при 100 мкг / мл G418.
Для получения конструкции разрушения гена ACG два фрагмента ДНК гена acgA , содержащие нуклеотиды 29-922 и 1761-2184, амплифицировали с помощью ПЦР из вектора pGACG (Pitt et al., 1992), используя олигонуклеотиды AcgKO1-4 (), которые добавляют сайты 5′-BamHI и 3′-KpnI к первому фрагменту и сайты 5′-XbaI и 3′-BamHI ко второму фрагменту. Эти фрагменты были последовательно клонированы в pBsrΔBam, расщепленную BamHI / KpnI и расщепленную XbaI / BamHI (Sutoh, 1993). Конструкцию линеаризовали с помощью BamHI, что давало плазмиду pBsrΔBam, фланкированную 894 п.н. и 423 п.н. 5′- и 3′-последовательностью AcgA соответственно, и вводили в клетки AX2 дикого типа. Трансформированные клетки отбирали для роста при 5 мкг / мл бластицидина, и отобранные клоны подвергали скринингу на гомологичную рекомбинацию с помощью двух отдельных реакций ПЦР и анализа саузерн-блотов геномных расщеплений.
Гистохимические и спектрофотометрические анализы β-галактозидазы
Для визуализации активности β-галактозидазы в развивающихся структурах клетки распределяли при 10 7 клеток / см 2 на нитроцеллюлозных фильтрах, поддерживаемых агаром PB, и инкубировали при 22 ° C. Структуры фиксировали в 0,25% глутаровом альдегиде, содержащем 2% Tween-20, и окрашивали X-gal, как описано ранее (Dingermann et al., 1989).
Для спектрофотометрического измерения активности β-галактозидазы клетки лизировали замораживанием-оттаиванием и 100 мкл аликвоты лизата инкубировали при 22 ° C в лунках микротитровального планшета с 30 мкл 2.5 × Z-буфер и 20 мкл 40 мМ хлорфенол-β-D-галактопиранозида (Schaap et al., 1993). OD 574 измеряли через регулярные интервалы времени с использованием считывающего устройства для микротитровальных планшетов. Активность β-галактозидазы в ΔOD 574 / мин вычисляли из временных интервалов, в которых продукт реакции накапливался линейно, и стандартизировали по содержанию белка в образцах. Активность, наблюдаемую в нетрансформированных клетках, вычитали как бланк анализа.
Иммунологические методы
Для иммуноблоттинга образцы 2 × 10 клеток 7 осаждали и кипятили в 50 мкл буфера для образцов SDS.50 мкг образцов общего белка фракционировали по размеру на 8% SDS-PAA гелях и переносили на нитроцеллюлозные мембраны. Мембраны инкубировали в течение ночи при 4 ° C с разведением 1: 2000 пептидного антитела αACG (Saran and Schaap, 2004), промывали и инкубировали с разведенными 1: 2000 козьими антикроличьими антителами, связанными с пероксидазой хрена (Promega, США). ). Детектирование проводили с помощью набора для хемолюминесценции Supersignal (Pierce, США) в соответствии с инструкциями производителя.
Для иммуно-цитохимии слизни собирали в 20 мМ EDTA в PB и диссоциировали на отдельные клетки, пропуская через иглу 23 размера.Клетки помещали в виде аликвот по 10 мкл из 10 7 клеток / мл на 8-луночные многотестовые слайды, покрывали агарозой (Fukui et al., 1986) и фиксировали в течение 10 минут в ледяном метаноле. Срезы инкубировали в течение ночи с антителом αACG, разведенным 1: 500, и с разбавленным 1: 200 FITC-конъюгированным козьим антителом против кроличьего IgG (GARFITC) в течение 1 часа. Затем клетки инкубировали в течение 1 часа с разведенным 1: 500 мышиным моноклональным антителом 83.5 (Zhang et al., 1999) и в течение 1 часа с разведенным 1: 500 козьим антимышиным IgG, конъюгированным с Texas Red.Споры собирали с плодовых тел и окрашивали антителом αACG и GARFITC.
Для иммуноокрашивания целых образцов интактные структуры осторожно переносили с перевернутого среза поддерживающего агара на 10 мкл PB, депонированные в лунки 8-луночных мультистестовых слайдов, покрытых полилизином. Жидкость аспирировали, структуры фиксировали в метаноле и инкубировали с антителом αACG и GARFITC, как описано выше. Препараты фотографировали с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа Leica TCS SP2.
Для измерения доли преспоровых клеток полностью мигрирующие слизни диссоциировали на отдельные клетки путем повторной аспирации 1% (мас. / Мас.) Целлюлазы в 2 мМ EDTA, pH 6,5. Затем клетки фиксировали в метаноле и инкубировали в течение 16 часов при 4 ° C с разведенной споровой сывороткой 1:50 (Takeuchi, 1963) и в течение 1 часа с разбавленной 1: 200 GARFITC. Образцы контрастировали 1 мкг / мл 4,6-диаминидино-2-фенилиндола (DAPI). Клетки фотографировали с использованием флуоресцентного микроскопа Leica DM LB2, а также общие клетки (окрашенные DAPI) и преспоровые клетки (клетки с . 3 везикулы, окрашенных FITC).
Обнаружение РНК с помощью
in situ гибридизации и ОТ-ПЦРГибридизация in situ
Клетки инкубировали при 10 6 клеток / см 2 на диализной мембране, поддерживаемой агаром PB, до тех пор, пока не достигли желаемых стадий развития. был достигнут. Гибридизацию in situ с 200 нг / мл дигоксигенина (DIG), меченного РНК AcrA , проводили, как описано ранее (Escalante and Loomis, 1995). Антисмысловой зонд AcrA использовали в качестве контроля.Для получения зондов фрагмент AcrA размером 520 п.н. амплифицировали из геномной ДНК с использованием праймеров AcrAcat5 ‘и AcrAcat3’ () и клонировали в pBluescript KS +, расщепленный EcoRI / BamHI. Фрагмент AcrA впоследствии амплифицировали с помощью ПЦР с использованием универсальных праймеров M13-20 и «обратных». Очищенный продукт ПЦР служил матрицей для синтеза смысловых и антисмысловых DIG-меченных РНК-зондов AcrA с использованием РНК-полимераз SP6 и T7 и реагентов из набора для мечения РНК DIG (Roche, Великобритания).
RT-PCR
Для полуколичественного определения мРНК ACG во время развития РНК экстрагировали с помощью мини-набора RNAeasy (Qiagen, Crawley, UK) с 2-часовыми интервалами из клеток, развивающихся на агаре PB. Реакции ОТ-ПЦР проводили на 400 нг общей РНК с использованием праймеров ACGRT5 ‘и ACGRT3’ () и набора для одностадийной ОТ-ПЦР (Qiagen, Crawley, UK).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Транскрипция ACG во время развития
DictyosteliumНизкие уровни мРНК ACG ранее выявлялись только в спорах (Pitt et al., 1992). Это не препятствует экспрессии на более ранней стадии, поскольку в Нозерн-блоттинге уровни в 2–3 раза более низкие. Чтобы получить больше информации о пространственно-временном паттерне транскрипции ACG, мы слили 2,8 т.п.н. 5′-фланкирующей последовательности гена ACG с репортерным геном β-галактозидазы (gal). Исходный штамм AX3 трансформировали конструкцией ACG :: gal , и развивающиеся структуры окрашивали X-gal для определения активности β-галактозидазы. Удивительно, но активность β-галактозидазы уже присутствовала в агрегирующих клетках и новообразованных слизняках, хотя активность была наиболее выражена в головке спор плодовых тел ().Поскольку белок β-галактозидаза стабилен, он будет постепенно накапливаться в клетках, даже если транскрипция гена низкая. Чтобы выяснить, вызвало ли это несоответствие между ACG :: gal и более ранними данными мРНК, мы провели второе слияние гена промотора ACG с ile-gal, который кодирует лабильный белок β-галактозидазы (Detterbeck et al., 1994) . В клетках, трансформированных этой конструкцией, активность β-галактозидазы практически не обнаруживалась в слизняках (), но становилась видимой в области prespore средних кульминантов ().Это указывает на то, что активность промотора ACG должна быть низкой на раннем этапе развития и значительно возрастает только в начале формирования плодовых тел.
Активность промотора ACG в развивающихся структурах(A-C) Клетки D. discoideum дикого типа трансформировали вектором ACG :: gal, который содержит гибридный ген промотора ACG и репортерного гена β-галактозидазы. Клетки голодали на нитроцеллюлозных фильтрах, поддерживаемых агаром с PB, и развивающиеся структуры фиксировали и окрашивали X-gal.А) агрегат, Б) стоячий слизень, В) зрелое плодовое тело.
(D, E) D. discoideum клетки дикого типа трансформировали вектором ACG :: ile-gal, где ile-gal кодирует лабильную форму β-галактозидазы с периодом полужизни 30 минут. Слизни (D) и средние кульминанты (E) окрашивали X-gal. Длина стержня 100 мкм.
Уровни белка ACG во время развития
Затем мы измерили онтогенетическую регуляцию экспрессии белка ACG с помощью иммуноблоттинга с использованием антитела к пептиду ACG, специфичность которого была повышена и протестирована ранее (Saran and Schaap, 2004).показывает, что в клетках дикого типа уровни белка ACG быстро увеличиваются во время формирования кончика, достигая плато у мигрирующих слизней. Формирование плодовых тел сопровождалось дальнейшим умеренным увеличением уровня белка ACG. Этот паттерн экспрессии больше согласуется с экспрессией генов prespore, чем с генами спор. Чтобы проверить это дальше, мы измерили экспрессию ACG в нуль-мутанте ACB / acrA (Kim et al., 1998; Soderbom et al., 1999). ACB важен для экспрессии генов спор, но не для дифференцировки преспоровых клеток.Однако и у мутанта acrA- белок ACG быстро накапливался во время формирования кончиков, с незначительным увеличением зрелых плодовых тел ().
Регуляция развития транскрипции ACG и накопления белка ACGA, B). Клетки Dictyostelium дикого типа (WT) (A), мутант acrA (B) и обе клеточные линии, трансформированные конструкцией ACG :: ile-gal, инкубировали в течение 24 часов на агаре PB. Каждые 2 часа собирали клетки WT и acrA-, лизировали в буфере для образцов SDS-PAGE и проводили иммуноблоттинг с антителом αACG.Антитело αACG реагирует на одну полосу около 98 кДа, прогнозируемый размер ACG.
C. Клетки, трансформированные ACG-ile-gal, лизировали и анализировали на активность β-галактозидазы с использованием спектрофотометрического анализа (■, □). Данные выражены в процентах от активности β-галактозидазы, измеренной через 24 часа в клетках дикого типа. Представлены средства двух экспериментов, проанализированных в трех экземплярах. На этой панели также показаны данные, полученные в результате денситометрического сканирования полос ACG в иммуноблотах на панелях A, B (●, ○).Значения оптической плотности сканирования выражены в процентах от значения, полученного для WT через 24 часа.
D. Суммарную РНК экстрагировали из развивающихся клеток WT с 2-часовыми интервалами и подвергали ОТ-ПЦР в течение 25, 30 и 35 циклов с использованием праймеров, дающих продукт, который охватывает два интрона в гене ACG. Продукт был впервые обнаружен после 30 циклов (показано здесь) как при амплификации кДНК (нижняя полоса), так и при загрязнении гДНК (верхняя полоса). В контрольной реакции отсутствовала РНК.
Профили накопления белка ACG, измеренные здесь, и мРНК ACG , измеренные ранее (Pitt et al., 1992) совершенно разные: мРНК обнаруживается только на стадии спор. Мы использовали более чувствительный анализ репортерного гена для определения профиля развития активности промотора ACG в клетках дикого типа и acrA-, трансформированных конструкциями ACG :: ile-gal. показывает, что в соответствии с более ранними данными, активность промотора ACG показывает резкое увеличение во время формирования плодовых тел. Тем не менее, в течение всего периода развития наблюдается низкая, но обнаруживаемая активность.Это объясняет, почему стабильный белок β-галактозидазы может накапливаться на раннем этапе развития (). Активность промотора ACG и синтез белка ACG были нормальными в клетках acrA-. Это указывает на то, что в отличие от других генов спор (Soderbom et al., 1999), экспрессия ACG не зависит от активности ACB.
Чтобы оценить, синтезируется ли мРНК ACG в процессе разработки, мы использовали ОТ-ПЦР для амплификации фрагмента кДНК ACG , который охватывает два (сплайсированных) интрона ACG из РНК, выделенной во время разработки.показывает, что продукт, полученный из РНК, с прогнозируемым размером 333 п.н. амплифицировался на всех стадиях развития, но наиболее сильно — на плодовых телах. Также была амплифицирована полоса 532 п.н., которая ожидается для продукта, полученного из геномной ДНК. Эти данные подтверждают, что ACG транскрибируется на протяжении всего развития.
Локализация ACG в клетках и тканях
Чтобы понять роль ACG в слизняках, мы сначала визуализировали паттерн экспрессии белка ACG. показывает, что у новообразованных слизней белок ACG был локализован исключительно в задней области prespore.В средних кульминантах белок ACG был высоко экспрессирован во всей области prespore, но отсутствовал в области стебля, prestalk и нижней части чашки (). В спорах ACG был локализован на периферии клетки, как и следовало ожидать от трансмембранного осмосенсора (). Однако у слизней окрашивание αACG распределялось по клеткам пунктирным образом, напоминая распределение везикул prespore. Чтобы проверить это, мы дважды окрашивали слизистые клетки антителом αACG () и антителом αSP85 (Zhang et al., 1999) (). SP85 представляет собой белок оболочки споры, который связан с везикулами преспор (Zhang et al., 1998). Наложенное изображение () показывает, что ACG и SP85 совместно локализованы в одних и тех же клеточных компартментах, которые, скорее всего, представляют собой везикулы prespore.
Белок ACG в интактных структурах и клеткахИнтактные слизни дикого типа (A), плодовые тела (B), споры (C) фиксировали в метаноле и окрашивали . ACG-антитело и FITC-конъюгированные козьи антикроличьи IgG (GARFITC).
Д-Ф).Слизни диссоциировали на отдельные клетки, которые сначала окрашивали антителом αACG и GARFITC, а затем моноклональным антителом мыши mAb83.5, которое было индуцировано против белка оболочки споры SP85 (Zhang et al., 1999) и конъюгированного с техасским красным козьим антимышиный IgG. Неповрежденные структуры и клетки были сфотографированы с использованием конфокального лазерного сканирующего микроскопа Leica TCS SP2 с использованием возбуждения 596 нм и эмиссии 620 нм для Texas Red и возбуждения 495 нм и эмиссии 520 нм для FITC. На панели F изображения D и E наложены, чтобы показать совместную локализацию ACG и SP85.Длина стержней в A, B: 100 мкм, C: 1 мкм и D: 10 мкм.
Роль ACG в слизнях
DictyosteliumЛокализация ACG в задней области преспоры слизи предполагает, что ACG может потребоваться для производства внеклеточного цАМФ, который необходим для индукции дифференцировки преспор (Schaap and Van Driel, 1985 ; Wang et al., 1988) и / или внутриклеточный цАМФ для активации PKA, который необходим для экспрессии подмножества prespore генов (Hopper et al., 1993).Первоначально было описано, что нулевые мутанты в ACG образуют нормальные плодовые тела, но структуры не были изучены подробно (Pitt et al., 1992). Мы сравнили преспорную дифференцировку и дифференцировку спор у нулевых мутантов по ACG, ACB / AcrA и у мутанта, не обладающего ни одной активностью. Этот мутант был получен путем экспрессии ACGΔcat, доминантно-отрицательного ингибитора ACG (Saran and Schaap, 2004) в клетках acrA- под конститутивным промотором actin15. Был создан новый мутант acg-, потому что формирование плодовых тел у исходного мутанта со временем ухудшилось.
Чтобы оценить влияние мутаций на дифференцировку преспор, мы измерили как долю преспоровых клеток в диссоциированных слизняках, так и экспрессию гена преспоры CotB (Fosnaugh and Loomis, 1993; Gomer et al., 1986) во время нормального развития. плодовым телам. показывает, что процентное содержание преспор в общем количестве клеток снизилось с 64% до 50% в клетках acrA- и до 40% в клетках acg-. Наиболее сильное снижение примерно до 1/4 доли преспор дикого типа наблюдается в клетках acrA- / ACGΔcat .Онтогенетическая экспрессия гена prespore CotB показала сходный паттерн (). В клетках acrA- экспрессия cotB была немного снижена, в клетках acg- снижение было более серьезным, а в клетках acrA- / ACGΔcat мРНК CotB почти исчезла.
Преспоры и дифференцировка спор у мутантов аденилатциклазыA. Слизни клеток дикого типа, acrA-, acg- и acrA- / A15 :: ACGΔcat , которые мигрировали в течение 2-3 часов, диссоциировали и окрашивали со спороспецифической антисывороткой и GARFITC.Ядра клеток контрастировали с DAPI. Определяли процентное соотношение преспоровых клеток (клеток, по меньшей мере, с 3-4 флуоресцентными вакуолями) по отношению к окрашенным DAPI клеткам. Представлены средние и SE четырех экспериментов. Существенные различия (P> 0,95) между наборами данных, соединенными скобками, как определено ANOVA Краскела-Уоллиса по рангам с использованием программного обеспечения SigmaStat (Systat, Сан-Хосе, США), отмечены звездочками.
B. Дикий тип, acrA-, acg- и acrA- / A15 :: ACGΔcat выращивали на агаре PB до образования плодовых тел.Полную РНК экстрагировали с 2-часовыми интервалами, фракционировали по размеру на 1,5% агарозных гелях, содержащих 2,2 М формальдегид, и переносили на нейлоновые мембраны (Nellen et al., 1987). Четыре нозерн-блота гибридизовали в одной партии с зондом CotB , меченным 32 PdATP, при 65 ° C, затем подвергали очистке и репробированию с конститутивно экспрессируемым геном 1G7 (Williams et al., 1987).
C. Трехдневные плодовые тела дикого типа, клетки acrA-, acg- и acrA- / A15 :: ACGΔcat переносили на предметное стекло и окрашивали целлюлозным красителем Calcofluor при 0.Конечная концентрация 03% (мас. / Об.). Препараты фотографировали в УФ-свете с помощью флуоресцентной микроскопии для визуализации спор, окрашенных Calcofluor, в присутствии низкого уровня трансиллюминации для получения фазово-контрастного изображения оставшихся амеб. Длина стержня 10 мкм.
Все три линии мутантных клеток все еще образовывали плодовые тела. Как сообщалось ранее (Soderbom et al., 1999), головки спор зрелых плодовых тел acrA- содержали большое количество амебоидных клеток и лишь несколько спор ().Напротив, большинство клеток в головках спор acg- созрели в споровые клетки. Однако в головках спор acrA- / ACGΔcat было видно только несколько спор и несколько пустых ящиков спор. Оставшиеся споры были чрезвычайно хрупкими и часто разрывались при переносе на предметное стекло для наблюдения.
Эти объединенные данные показывают, что потеря ACG является наиболее пагубной для дифференцировки преспор, в то время как потеря ACB оказывает сильнейшее влияние на созревание спор.Однако два фермента демонстрируют значительную функциональную избыточность, и наиболее тяжелые фенотипы дифференцировки как преспор, так и спор становятся очевидными, когда они оба теряются.
cAMP Индукция экспрессии гена prespore в мутантах аденилатциклазы
Для индукции большинства генов prespore, таких как CotB , требуется как внеклеточный cAMP, действующий на cAR, так и внутриклеточный cAMP, действующий на PKA (Hopper et al., 1995; Schaap and Ван Дриэль, 1985). Однако ген prespore PsA менее чувствителен к устранению функции PKA (Hopper et al., 1993). Чтобы проверить, опосредуют ли ACG и / или ACB как внутриклеточные, так и внеклеточные функции цАМФ, мы измерили, в какой степени экспрессия гена CotB и PsA восстанавливалась внеклеточным цАМФ у нулевых мутантов аденилатциклазы. показывает, что экспрессия гена PsA почти полностью восстанавливается внеклеточным цАМФ как в мутантах acrA-, acg- и acrA- / ACGΔcat . Однако индукция CotB была снижена у мутанта acrA- и acg- и почти отсутствовала у мутанта acrA- / ACGΔcat .Эти результаты показывают, что ACG и ACB выполняют перекрывающиеся роли в активации как cAR, так и PKA.
Индукция экспрессии гена prespore в мутантах аденилатциклазыКомпетентные к агрегации клетки дикого типа, acrA-, acg- и acrA- / A15 :: ACGΔcat встряхивали в течение 8 часов в присутствии и в отсутствие 300 мкМ cAMP, добавляется каждый час. Тотальную РНК выделяли с 2-часовыми интервалами, и все образцы РНК фракционировали по размеру на одном геле и переносили на одну мембрану, которую последовательно зондировали с помощью [ 32 P] dATP-меченного CotB, PsA и 1G7 . ДНК-зонды.
Влияние ACG на экспрессию
AcrAACB не влияет на экспрессию мРНК или белка ACG (), но неясно, влияет ли ACG на экспрессию ACB / AcrA. Сначала мы исследовали пространственный паттерн экспрессии AcrA путем гибридизации in situ (). Удивительно, но AcrA специфически экспрессируется в области перед стеблем слизней и плодовых тел. Чтобы подтвердить этот результат и исследовать, влияет ли ACG на паттерн экспрессии ACB, мы приготовили слитую конструкцию промотора AcrA с репортером LacZ и экспрессировали конструкцию в клетках дикого типа и acg-.показывает, что в клетках дикого типа промотор AcrA почти исключительно активен в клетках prestalk. Однако в нуль-мутанте acg- промоторная активность AcrA распространяется на всю область prespore (). Это указывает на то, что ACG обычно действует, подавляя активность промотора AcrA в преспоровых клетках.
Экспрессия AcrA в клетках дикого типа и acg-A, B) Экспрессия AcrA , обнаруженная гибридизацией in situ.Клетки дикого типа голодали на диализной мембране, поддерживаемой PB-агаром. МРНК AcrA визуализировали в мигрирующих слизняках (А) и средних кульминантах (В) путем гибридизации in situ с РНК-зондом AcrA , меченным DIG.
C, D) Клетки дикого типа (C) и acg- (D) трансформировали вектором AcrA :: ala-gal, который содержит гибридный ген промотора AcrA и ala-gal, который кодирует стабильная форма β-галактозидазы. Мигрирующие слизни фиксировали и окрашивали X-gal для визуализации активности β-галактозидазы.Клетки, трансформированные AcrA-ile-gal, давали такую же картину, но интенсивность окрашивания была очень низкой (данные не показаны). Длина стержня 100 мкм.
ОБСУЖДЕНИЕ
Низкий уровень мРНК ACG ранее обнаруживался только в спорах, и исследования функции ACG до сих пор сосредоточены на стадии спор (Pitt et al., 1992; Saran and Schaap, 2004; Van Es et al. ., 1996). Наши настоящие данные подтверждают, что экспрессия гена ACG сильно повышается в созревающих плодовых телах, однако также существует значительная транскрипция на протяжении всего развития.Примечательно, что белок ACG активируется за 12 часов до образования плодовых тел в отсутствие соответствующего увеличения транскрипции. Белок ACG сначала появляется в холмиках с кончиками, а затем накапливается в преспоровой области слизняков, где он локализуется совместно с везикулами преспор. В этом месте сенсорный домен ACG будет обращен к просвету везикулы, а его каталитический домен будет обращен к цитозолю. Когда везикулы преспоры сливаются с плазматической мембраной в процессе созревания спор, сенсорный домен ACG становится доступным для внешней части клетки.
Значительная ACG-подобная активность (1,7 пмоль цАМФ / мин. 10 7 клеток) могла быть ранее обнаружена в лизатах слизняков (Meima and Schaap, 1999; и Meima, M. неопубликованные данные), но осмотимуляции ACG не обнаружено в интактных слизняках. Это указывает на то, что везикулярная локализация ACG не мешает его ферментативной активности, потому что каталитический домен все еще будет экспонироваться субстрату Mg 2+ -ATP в цитозоле. Однако осмостимуляция может быть либо невозможной, либо, в зависимости от осмоляльности окружающей среды в преспоровых везикулах, фермент всегда может находиться в стимулированном состоянии.Большая часть цАМФ, который продуцируется любой из трех аденилилциклаз Dictyostelium , быстро секретируется, что свидетельствует об общем неаденилилциклазозависимом механизме секреции цАМФ (Meima and Schaap, 1999; Pitt et al., 1992). Это означает, что пока цАМФ продуцируется в цитозоле, он может действовать как внутриклеточный, так и внеклеточный сигнал благодаря своей конститутивной секреции.
Ранняя работа показала, что внеклеточный цАМФ необходим и достаточен для индукции преспорового гена: микромолярный цАМФ, действующий на поверхностные рецепторы цАМФ, запускает дифференцировку препор (Schaap and Van Driel, 1985), в то время как истощение внеклеточного цАМФ в слизняках вызывает дедифференцировку преспоровых клеток ( Wang et al., 1988). Однако было менее ясно, как микромолярные концентрации цАМФ производятся в задней части слизистой оболочки. Специфическая для агрегации аденилилциклаза ACA подавляется в слизняках и остается экспрессированной только в кончиках (Verkerke-van Wijk et al., 2001). Нулевые мутанты AcrA дефектны в отношении созревания спор, но не в отношении дифференцировки преспор (Soderbom et al., 1999). Мы показываем здесь, что дифференцировка преспор значительно снижена в клетках acg- и почти исчезла у мутантов, у которых нарушена функция как ACG, так и ACB.Такие мутанты также не происходят от каких-либо зрелых спор. Эти данные указывают на то, что ACG и ACB играют комбинаторные роли в дифференцировке преспор и спор, причем ACG преимущественно отвечает за первый ответ, а ACB — за второй.
Неожиданно AcrA / ACB специфически экспрессируется в клетках prestalk, что позволяет предположить, что его эффекты на созревание спор могут быть косвенными. В отсутствие ACG AcrA / ACB экспрессируется во всей области препор, что адекватно объясняет, почему дифференцировка преспор только частично теряется в клетках acg-.Низкий остаточный уровень экспрессии гена prespore, который все еще присутствует в слизнях, у которых нарушены функции ACG и ACB, может быть связан с оставшимся ферментом ACA.
Экспрессия большинства генов prespore требует не только внеклеточного цАМФ, действующего на рецепторы цАМФ, но также внутриклеточного цАМФ, действующего на ПКА (Hopper et al., 1993). Мы показываем, что ACG продуцирует цАМФ для обеих функций (), и ранее было показано, что он продуцирует цАМФ для активации PKA на стадии спор. Здесь ACG действует как датчик высокого уровня осмолитов в головке спор, который служит для удержания спор в состоянии покоя (Saran and Schaap, 2004; Van Es et al., 1996; Вирди и др., 1999). Недавняя работа в нашей лаборатории показывает, что ген ACG сохранялся на протяжении всей филогении Dictyostelid (Ritchie, A.V. и Schaap, P., в стадии подготовки). Помимо образования спор в плодовых телах, многие виды Dictyostelid могут энцистировать как отдельные клетки, что представляет стратегию выживания их предков, одиночных амеб (Raper, 1984). Процесс энцистации запускается из-за высокой осмоляльности и требует активации PKA (Ritchie, A.V. and Schaap, P., в подготовке. Следовательно, кажется, что роль ACG в дифференцировке преспор и покое спор происходит из глубоко законсервированной роли в энцистации.
БЛАГОДАРНОСТИ
Мы благодарим Криса Уэста (Университет Оклахомы, Оклахома-Сити) за моноклональное антитело 83,5, Питера Девреотеса (Университет Джона Хопкинса, Балтимор) за клеток aca- и вектор pGACG, а также Билла Лумиса (Калифорнийский университет в Лос-Анджелесе). Jolla) для ячеек acrA- . Это исследование было поддержано грантами BBSRC COD16760, грантом Голландского научного фонда (NWO) 805.17.047 и гранты Wellcome Trust 057137 и 076618.
ССЫЛКИ
- Anjard C, Loomis WF. Передача сигналов пептида во время терминальной дифференцировки Dictyostelium . Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 2005; 102: 7607–7611. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Деттербек С., Морандини П., Веттерауэр Б., Бахмар А., Фишер К., Мак-Вильямс, Гонконг. «Prespore-like клетки» Dictyostelium перестали экспрессировать ген prespore: анализ с использованием короткоживущих бета-галактозидаз в качестве репортеров.Разработка. 1994; 120: 2847–2855. [PubMed] [Google Scholar]
- Дингерманн Т., Рейндл Н., Вернер Х., Хильдебрандт М., Неллен В., Харвуд А., Уильямс Дж., Нерке К. Оптимизация и обнаружение in situ экспрессии гена бета-галактозидазы Escherichia coli в Dictyostelium discoideum . Ген. 1989. 85: 353–362. [PubMed] [Google Scholar]
- Escalante R, Loomis WF. Полная гибридизация in situ мРНК, специфичных для клеточного типа, в Dictyostelium .Dev. Биол. 1995; 171: 262–266. [PubMed] [Google Scholar]
- Фосно К.Л., Лумис В.Ф. Энхансерные области, ответственные за временную и специфичную для клеточного типа экспрессию гена оболочки споры в Dictyostelium . Dev. Биол. 1993. 157: 38–48. [PubMed] [Google Scholar]
- Фукуи Ю., Юмура С., Юмура Т.К., Мори Х. Метод наложения агара: иммунофлуоресценция с высоким разрешением для исследования сократительного аппарата. Методы Энзимол. 1986; 134: 573–580. [PubMed] [Google Scholar]
- Gomer RH, Datta S, Firtel RA.Клеточное и субклеточное распределение регулируемого цАМФ белка prestalk и белка prespore в Dictyostelium discoideum : исследование онтогенеза клеток prestalk и prespore. J. Cell Biol. 1986; 103: 1999–2015. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Харвуд А.Дж., Друри Л. Новые векторы для экспрессии гена E.coli lacZ в Dictyostelium . Nucl. Acids Res. 1990; 18: 4292. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Hopper NA, Harwood AJ, Bouzid S, Véron M, Williams JG.Активация пути преспоры и споровых клеток дифференцировки Dictyostelium с помощью цАМФ-зависимой протеинкиназы и свидетельство ее восходящей регуляции аммиаком. EMBO J. 1993; 12: 2459–2466. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Hopper NA, Sanders GM, Fosnaugh KL, Williams JG, Loomis WF. Протеинкиназа а является положительным регулятором транскрипции гена оболочки споры в Dictyostelium . Дифференциация. 1995. 58: 183–188. [PubMed] [Google Scholar]
- Ким Х. Дж., Чанг В. Т., Мейма М., Гросс Дж. Д., Шаап П.Новая аденилатциклаза, обнаруженная в быстро развивающихся мутантах Dictyostelium . J. Biol. Chem. 1998; 273: 30859–30862. [PubMed] [Google Scholar]
- Ллойд Д., Тернер Н.А., Хункитти В., Ханн А.С., Ферр Дж.Р., Рассел А.Д. Энцистация в Acanthamoeba castellanii : развитие устойчивости к биоцидам. J. Eukaryot. Microbiol. 2001; 48: 11–16. [PubMed] [Google Scholar]
- Манн СКО, Ричардсон Д.Л., Ли С., Киммел А.Р., Фиртель Р.А. Экспрессия цАМФ-зависимой протеинкиназы в преспоровых клетках достаточна для индукции дифференцировки споровых клеток в Dictyostelium .Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 1994; 91: 10561–10565. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Марчиано-Кабрал Ф., Кабрал Г. Acanthamoeba spp . как возбудители болезней человека. Clin. Microbiol. Ред. 2003; 16: 273–307. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Макклеллан К., Ховард К., Мэйхью Э., Нидеркорн Дж., Ализаде Х. Адаптивные иммунные ответы на цисты Acanthamoeba . Exp. Eye Res. 2002. 75: 285–293. [PubMed] [Google Scholar]
- Мейма М.Э., Шаап П.Фингерпринт активности аденилилциклазы во время развития Dictyostelium указывает на доминирующую роль аденилилциклазы B в терминальной дифференцировке. Dev. Биол. 1999; 212: 182–190. [PubMed] [Google Scholar]
- Неллен В., Датта С., Реймонд С., Сивертсен А., Манн С., Кроули Т., Фиртель Р.А. Молекулярная биология в Dictyostelium : инструменты и приложения. В: Спудич Ю.А., редактор. Методы клеточной биологии. Орландо, Флорида: Academic Press; 1987. С. 67–100. [PubMed] [Google Scholar]
- Питт Г.С., Милона Н., Борлейс Дж., Лин К.С., Рид Р.Р., Девреотес П.Н.Структурно различные и стадийно-специфические гены аденилилциклазы играют разные роли в развитии Dictyostelium . Клетка. 1992; 69: 305–315. [PubMed] [Google Scholar]
- Raper KB. Диктиостелиды. Принстон, Нью-Джерси: Издательство Принстонского университета; 1984. [Google Scholar]
- Saran S, Schaap P. Аденилилциклаза G активируется внутримолекулярным осмосенсором. Мол. Биол. Клетка. 2004; 15: 1479–1486. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Шаап П., Ван Дриэль Р.Индукция постагрегационной дифференцировки в Dictyostelium discoideum с помощью цАМФ. Доказательства участия рецептора цАМФ на поверхности клетки. Exp. Cell Res. 1985. 159: 388–398. [PubMed] [Google Scholar]
- Шаап П., Ван Ментс-Коэн М., Соеде Р.Д., Брандт Р., Фиртель Р.А., Достманн В., Дженизер Х.Г., Джасторфф Б., Ван Хаастерт П.Дж. Проницаемые для клеток негидролизуемые производные цАМФ как инструменты для анализа сигнальных путей, контролирующих регуляцию генов в Dictyostelium . Дж.Биол. Chem. 1993; 268: 6323–6331. [PubMed] [Google Scholar]
- Шаульский Г., Эскаланте Р., Лумис В.Ф. Пути передачи сигнала развития, обнаруженные генетическими супрессорами. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 1996; 93: 15260–15265. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Шаульский Г., Фуллер Д., Лумис В.Ф. ЦАМФ-фосфодиэстераза контролирует PKA-зависимую дифференцировку. Разработка. 1998. 125: 691–699. [PubMed] [Google Scholar]
- Содербом Ф., Анджард К., Иранфар Н., Фуллер Д., Лумис В.Ф.Аденилилциклаза, которая функционирует во время позднего развития Dictyostelium . Разработка. 1999; 126: 5463–5471. [PubMed] [Google Scholar]
- Стэнли Дж., Сэмюэл Л. Амебиаз. Ланцет. 2003; 361: 1025–1034. [PubMed] [Google Scholar]
- Sutoh K. Вектор трансформации для Dictyostelium discoideum с новым селективным маркером bsr. Плазмида. 1993. 30: 150–154. [PubMed] [Google Scholar]
- Sutoh K. Вектор трансформации для Dictyostelium discoideum с новым селективным маркером bsr.Плазмида. 1993. 30: 150–154. [PubMed] [Google Scholar]
- Takeuchi I. Иммунохимические и иммуногистохимические исследования развития клеточной слизистой плесени Dictyostelium mucoroides. Dev. Биол. 1963; 8: 1–26. [PubMed] [Google Scholar]
- Томасон П.А., Трейнор Д., Кавет Дж., Чанг В.Т., Харвуд А.Дж., Кей Р.Р. Пересечение систем цАМФ / РКА и двухкомпонентной передачи сигнала в Dictyostelium . EMBO J. 1998; 17: 2838–2845. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- Thomason PA, Traynor D, Stock JB, Kay RR.Система RdeA-RegA, эукариотическая фосфореле, контролирующая распад цАМФ. J. Biol. Chem. 1999; 274: 27379–27384. [PubMed] [Google Scholar]
- Van Es S, Virdy KJ, Pitt GS, Meima M, Sands TW, Devreotes PN, Cotter DA, Schaap P. Аденилилциклаза G, осмосенсор, контролирующий прорастание спор Dictyostelium . J. Biol. Chem. 1996; 271: 23623–23625. [PubMed] [Google Scholar]
- Verkerke-van Wijk I, Fukuzawa M, Devreotes PN, Schaap P. Экспрессия аденилциклазы A тип-специфична для слизней Dictyostelium и направляет ядерную транслокацию StatA и экспрессию гена CudA.Dev. Биол. 2001; 234: 151–160. [PubMed] [Google Scholar]
- Вирди К.Дж., Сэндс Т.В., Копко С.Х., ван Эс С., Мейма М., Шаап П., Коттер Д.А. Высокий уровень цАМФ в спорах Dictyostelium discoideum : связь с покоем спор и ингибированием прорастания. Микробиология. 1999; 145: 1883–1890. [PubMed] [Google Scholar]
- Ван М., Ван Дриэль Р., Шаап П. Циклическая АМФ-фосфодиэстераза индуцирует дедифференцировку преспоровых клеток в слизняках Dictyostelium discoideum : свидетельство того, что циклический АМФ является морфогенетическим сигналом для дифференцировки преспор.Разработка. 1988. 103: 611–618. [Google Scholar]
- Ван Н., Содербом Ф., Анджард К., Шаульски Г., Лумис В. Ф. Индукция SDF-2 терминальной дифференцировки в Dictyostelium discoideum опосредуется трансмембранной сенсорной киназой DhkA. Мол. Клетка. Биол. 1999; 19: 4750–4756. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
- West CM, Erdos GW. Формирование спорового покрытия Dictyostelium . Dev. Gen.1990; 11: 492–506. [PubMed] [Google Scholar]
- Уильямс Дж. Г., Чеккарелли А., МакРобби С., Махбубани Х., Кей Р. Р., Ранний А., Беркс М., Джермин К. А..Прямая индукция экспрессии гена prestalk Dictyostelium с помощью DIF свидетельствует о том, что DIF является морфогеном. Клетка. 1987. 49: 185–192. [PubMed] [Google Scholar]
- Zhang Y, Zhang P, West CM. Связывающая функция целлюлозосвязывающего белка SP85 в оболочке спор Dictyostelium discoideum . J. Cell Sci. 1999; 112: 4367–4377. [PubMed] [Google Scholar]
- Zhang YY, Brown RD, West CM. Два белка оболочки спор Dictyostelium связываются с целлюлозой in vitro .Биохимия. 1998; 37: 10766–10779. [PubMed] [Google Scholar]
Прогноз акций Aurora Cannabis Inc до 14,41 долл. США
© 2021 Davos Investments LLC.
Заявление об отказе от ответственности: Прошлые результаты не являются гарантией будущих результатов. Этот продукт предназначен только для образовательных целей. Вы осуществляете практическое применение описанных здесь продуктов на свой страх и риск, и Financhill.com, его партнеры, представители и сотрудники не несут ответственности за любое использование или неправильное использование продукта.Обратитесь к своему финансовому консультанту за конкретным финансовым советом с учетом ваших личных обстоятельств. Любые показанные сделки являются гипотетическим примером и не представляют собой фактические сделки. Фактические результаты могут отличаться. Ничто здесь не является рекомендацией относительно конкретной проиллюстрированной безопасности.
Информация, представленная на этом сайте, не предназначена для использования в качестве единственной основы для каких-либо инвестиционных решений и не может быть истолкована как совет, предназначенный для удовлетворения инвестиционных потребностей любого конкретного инвестора.Ничто в нашем исследовании не является юридическим, бухгалтерским или налоговым советом или индивидуальным инвестиционным советом. Наше исследование подготовлено для широкого распространения и было подготовлено без учета индивидуальных финансовых обстоятельств и целей лиц, которые получают или получают к нему доступ. Наше исследование основано на источниках, которые мы считаем надежными. Однако мы не делаем никаких заявлений или гарантий, явных или подразумеваемых, в отношении точности нашего исследования, полноты или правильности, а также не даем никаких гарантий или других обещаний в отношении любых результатов, которые могут быть получены в результате использования нашего исследования.В максимальной степени, разрешенной законом, ни мы, ни наши аффилированные лица, ни какое-либо другое лицо не несем никакой ответственности перед каким-либо лицом за любые убытки или расходы, прямые, косвенные, косвенные, случайные или иные, возникающие в результате каким-либо образом к любому использованию или уверенности в наших исследованиях или содержащейся в них информации. Некоторые обсуждения содержат прогнозные заявления, основанные на текущих ожиданиях и ожидаемых различиях. Все наши исследования, включая оценки, мнения и информацию, содержащиеся в них, отражают наше суждение на дату публикации или другого распространения исследования и могут быть изменены без предварительного уведомления.Кроме того, мы категорически отказываемся от какой-либо ответственности за обновление таких исследований. Инвестирование сопряжено со значительным риском. Прошлые результаты не являются гарантией будущих результатов, и может произойти потеря первоначального капитала. Никто, получающий наше исследование или имеющий к нему доступ, не должен принимать никаких инвестиционных решений без предварительной консультации со своим личным финансовым консультантом и проведения собственного исследования и комплексной проверки, включая тщательное изучение любых применимых проспектов, пресс-релизов, отчетов и других публичных документов эмитент рассматриваемых ценных бумаг.Никакая представленная информация не должна толковаться как предложение о продаже или покупке какой-либо конкретной ценной бумаги. Как всегда, при инвестировании руководствуйтесь здравым смыслом.
Financhill не является инвестиционным консультантом и не зарегистрирован в Комиссии по ценным бумагам и биржам США или Управлении регулирования финансовой отрасли. Кроме того, владельцы, сотрудники, агенты или представители Financhill не действуют в качестве инвестиционных консультантов и могут не быть зарегистрированы в Комиссии по ценным бумагам и биржам США или в Регулирующем органе финансовой индустрии.
Содержание любого из веб-сайтов, продуктов или сообщений Financhill предназначено только для образовательных целей. Ничто в ее продуктах, услугах или сообщениях не может быть истолковано как предложение и / или рекомендация купить или продать ценную бумагу. Торговля акциями, опционами и другими ценными бумагами сопряжена с риском. Риск потери торговых ценных бумаг может быть значительным. Риск, связанный с торговлей акциями, опционами и другими ценными бумагами, подходит не всем инвесторам. Перед покупкой или продажей опциона инвестор должен оценить свое личное финансовое положение и рассмотреть все соответствующие факторы риска.См .: Характеристики и риски стандартизированных опционов. Образовательная программа обучения и программные услуги Financhill.com предназначены для улучшения понимания финансовых вопросов.